Analýza katalytických aminokyselin halogenalkandehalogenázy, luciferázy a jejich rekonstruovaného předka
Ročník: 38 (2015/16)
Kategorie: 3: Chemistry
1. místo 
Hlavním cílem projektu je získat porozumění strukturní podstaty katalytických vlastností rekonstruovaného předka dvou funkčně odlišných enzymů, halogenalkandehalogenáz a luciferázy z Renilla reniformis, vykazujícího duální hydrolázovou a oxidoreduktázovou aktivitu. V projektu chceme dále pochopit, proč oba současné enzymy mají odlišné katalytické funkce, přestože sdílejí vysokou sekvenční a strukturní podobnost. Konkrétním cílem této práce bylo stanovení a následné porovnání pH profilů rekonstruovaného předka a obou současných enzymů, vybrané halogenalkandehalogenázy LinB a luciferázy RLuc, za účelem:
(i) zjistit, zda se na duální aktivitě předka podílejí tytéž katalytické aminokyseliny a (ii) zda za oxidoreduktázovou aktivitu předka a RLuc odpovídají stejné katalytické aminokyseliny. Z toho důvodu bylo nejprve nutné všechny studované enzymy připravit v dostatečném množství a čistotě pro jejich následnou biochemickou charakterizaci. V průběhu práce bylo nutné dále zjistit, jak závisí stabilita použitého substrátu pro luciferázovou aktivitu (koelenterazinu) na pH a zda jeho případný samovolný rozklad neovlivňuje výsledky analýzy.